ПОЛУЧЕНИЕ ВЕКТОРНЫХ КОНСТРУКЦИЙ ДЛЯ ЭКСПРЕССИИ ПЕРВОЙ СУБЪЕДИНИЦЫ ГЕМАГГЛЮТИНИНА ВИРУСА ГРИППА ТИПА А
На данный момент значительную обеспокоенность вызывает распространение в мире эпизоотий вируса гриппа птиц. Вирус гриппа обладает наиболее высокой генетической вариабельностью и вероятностью появления новых штаммов, способных создавать большие эпидемии. Эволюция вируса гриппа протекает очень быстро, следовательно, первостепенной задачей исследователей является антигенное картирование подтипов гемагглютинина, а также выявления особенностей антигенной структуры. Рентгеновская кристаллография является часто используемым методом при определении трехмерной структуры белка.
Целью данных исследований являлось получение векторных конструкций для экспрессии белка первой субъединицы вируса гриппа типа А для дальнейшей экспрессии в бактериальной системе.
В результате проведенных исследований были синтезированы специфические праймеры для амплификации гена первой субъединицы гемагглютинина. При дизайне олигонуклеотидов для наибольшей специфичности учитывали все критерии, предъявляемые праймерам для ПЦР. Для праймеров были выбраны эндонуклеазы рестрикции NcoI и XhoI, сайты которых отсутствуют в последовательности самого гена и присутствуют в мультиклональном участке плазмиды. Также в ходе проведенных исследований была получена генетическая конструкция для экспрессии белка первой субъединицы гемагглютинина в клетках E.coli. Полученный рекомбинантный белок будет использован для дальнейших работ по кристаллографии и трехмерному моделированию белка.